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2'-O-Methyltransferase (50U/ul)

mRNA Cap-2'-氧甲基转移酶 (50U/ul)
规格
GMP
目录号
ON-014-G
纯度
>95% by SDS-PAGE
储存条件
-20℃
来源
重组大肠杆菌

产品描述:mRNA Cap-2'-O-Methyltransferase 是经大肠杆菌表达、纯化的来源于牛痘病毒的重组蛋白。能特异性的将 SAM 中的甲基转移至 RNA Cap0 上形成 Cap1 的结构。Cap1 结构的 RNA 更能有效地翻译,改善 mRNA 转染实验中的蛋白表达量。mRNA Cap-2'-O-Methyltransferase 需要以 m7GpppN Cap 结构的 RNA 为底物。

来源:重组大肠杆菌

规格:50U/μL

活性单位定义:1 单位酶活定义为 37℃,1 小时掺入 10pmols 甲基到 80nt Capped 0 RNA 所用的酶量。

酶存储缓冲液:20mM Tris-HCl(pH8.0),0.1mM EDTA,100mM NaCl,1mM DTT,0.1%(v/v) Triton X-100,50%(v/v) glycerol。

配套溶液:10X Capping Buffer(Cat#ON-073),500mM Tris-HCl(pH8.0),50mM KCl,10mM MgCl2,10mM DTT,S-adenosylmethionine (SAM), 32mM(Cat#ON-074)。

1. 反应体系中不能含有 EDTA;

2. 如为了 RNA 的稳定性,而加入核糖核酸酶抑制剂,按手册中反应体系加入至终浓度为 1U/μL 即可;

3. 在 pH7.0-8.0,SAM 不稳定,每次反应前需要新稀释 SAM 至 2mM;

4. 在反应前,应对 RNA 进行热处理,保证转录产物的 5' 末端二级结构打开;对高二级结构的 RNA 可以提高热变性条件,如 65℃ 20 分钟,或 75℃ 10 分钟,或 85℃ 5 分钟;

5. Vaccinia Capping Enzyme 和 2'-O-methyltransferase 可以一起反应用于生产 Cap1 结构的 RNA;

6. 对部分已知的含有复杂 5' 结构的 RNA,反应时间可以延长至 3 小时。

储藏温度:-20℃

质控检测:无 DNase、RNase 污染

纯度:SDS-PAGE 纯度:大于 95%

1. THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY Vol. 250, No. 24, Issue of December 25, pp. 9322-9329,1975.

2. Kuge, H. et al., (1998) Nucl. Acids Res. 26, 3208.