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Vaccinia Capping Enzyme

牛痘病毒加帽酶
目录号
ON-028
纯度
>95% by SDS-PAGE
储存条件
-20℃
来源
重组大肠杆菌

产品描述:Vaccinia Capping enzyme 是经大肠杆菌表达、纯化的来源于牛痘病毒的重组蛋白。能特异性将 7-甲基鸟苷酸帽子结构(Cap 0)加至 RNA 的 5' 端。Cap结构有助于真核生物 mRNA 的稳定、转运、翻译。Vaccinia Capping enzyme 由 D1R、D12L 双亚基组成,具有三种酶活性(RNA 三磷酸酶活性、鸟苷酸转移酶活性、鸟嘌呤甲基转移酶活性)。在体外转录,加帽过程需要 Vaccinia Capping enzyme、GTP、甲基供体(SAM)。

来源:重组大肠杆菌

规格:10U/μL

活性单位定义:1 单位酶活定义为 37℃,1 小时掺入 10pmols GTP 到 80nt 转录产物所用的酶量。

酶存储缓冲液:20mM Tris-HCl(pH8.0),0.1mM EDTA,100mM NaCl,1mM DTT,0.1%(v/v) Triton X-100,50%(v/v) glycerol。

配套溶液:10X Capping Buffer(Cat#ON-073),500mM Tris-HCl(pH8.0),50mM KCl,10mM MgCl2,10mM DTT;
S-adenosylmethionine (SAM), 32mM(Cat#ON-074),10mM GTP(Cat#ON-075)。

1. 反应体系中不能含有 EDTA;

2. 如为了 RNA 的稳定性,而加入核糖核酸酶抑制剂,按手册中反应体系加入至终浓度为 1U/μL 即可;

3. 在 pH7.0-8.0,SAM 不稳定,每次反应前需要新稀释 SAM 至 2mM;

4. 在反应前,应对 RNA 进行热处理,保证转录产物的 5' 末端二级结构打开;对高二级结构的 RNA 可以提高热变性条件,如 65℃ 20分钟,或 75℃ 10分钟,或 85℃ 5分钟;

5. Vaccinia Capping Enzyme 和 2'-O-methyltransferase 可以一起反应用于生产 Cap1 结构的 RNA;

6. 对部分已知的含有复杂 5' 结构的 RNA,反应时间可以延长至 3 小时。

储藏温度:-20℃

质控检测:无 DNase、RNase 污染

纯度:SDS-PAGE 纯度:大于 95%

1. Otto J.P. Kyrieleis, Jonathan Chang, Marcos de la Pena, et al. Structure. 22, 452-465(2014).

2. Konarska, M.M. et al., (1984) Cell 38, 731.

3. Kuge, H. et al., (1998) Nucl. Acids Res. 26, 3208.