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Uracil-DNA Glycosylase (UNG), heat-labile

尿嘧啶-DNA 糖基化酶 (UNG), 不耐热型
目录号
ON-054
纯度
>95% by SDS-PAGE
储存条件
-20℃
来源
重组大肠杆菌

产品描述:Uracil-DNA Glycosylase (UNG), heat-labile 是经大肠杆菌表达、纯化的来源于嗜冷海洋细菌的重组蛋白。能特异性识别 DNA 单链或双链中的尿嘧啶残基,并从 DNA 上水解释放游离尿嘧啶。对 RNA 无活性。该酶主要用于 PCR 扩增产物的防污染。

大肠杆菌来源的尿嘧啶-DNA 糖基化酶较为耐热,经 95℃,10min 处理仍会残留有少量的尿嘧啶-DNA 糖基化酶活性,导致含有 dU 碱基的 PCR 产物的降解。

来源于嗜冷海洋细菌的 Uracil-DNA Glycosylase (UNG), heat-labile 在 50℃,2min 即完全失活,在进行PCR扩增前,在 PCR混合液中添加尿嘧啶-DNA 糖基化酶(热敏性),25℃,10min 即可消除以往 PCR 产物的残留污染,由于尿嘧啶-DNA 糖基化酶(热敏性)在 PCR 循环的 94℃ 变性一步便可被灭活,因此不会影响新的含 dU 的 PCR 产物。

来源:重组大肠杆菌

规格:1U/μL

活性单位定义:37℃ 条件下,1 小时降解 1μg 含尿嘧啶碱基的单链 DNA 的酶量为 1U。

酶存储缓冲液:20mM Tris-HCl(pH 8.0),0.1mM EDTA,100mM KCl,1mM DTT,0.5%(v/v) Tween-20,0.5%(v/v) NP-40,50%(v/v) glycerol。

1. Uracil-DNA Glycosylase (UNG), E.coli  失活条件为 95℃ 10min,但是 Uracil-DNA Glycosylase (UNG), heat-labile 的失活条件为 50℃ 2min。

2. 在缺少稳定剂的 buffer 中(如 PCR buffer: 10mM Tris-HCl, pH8.0, 50mM KCl, 2.5mM MgCl2) ,酶随着温度的升高而加速失活。

3. 建议 50μL PCR 反应体系中加入 1U 的 Uracil-DNA Glycosylase (UNG), heat-labile。

4. Uracil-DNA Glycosylase (UNG), heat-labile 在 15~25℃ 范围内,拥有 100% 的酶活。

储藏温度:-20℃

质控检测:无 DNase、Nickase 和 RNase 污染

PCR carry-over prevention:以 5ng dUTP-containing PCR 产物为模板扩增 200bp 目的 DNA。在扩增前加入 1U Uracil-DNA Glycosylase (UNG), heat-labile 25℃,10min,无产物进行扩增。

纯度:SDS-PAGE 纯度:大于 95%

1. H. Sobek, M. Schmidt, B. Frey, K. kaluza. FEBS Letters. 388, 1-4(1996).