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T4 RNA Ligase 1

T4 RNA 连接酶 1
目录号
ON-081
纯度
10U/μL
储存条件
-20℃

产品描述:T4 RNA Ligase 1,也称为 T4 Rnl 1,是一种 ATP 依赖型连接酶,作用的底物范围很广,包括 RNA、DNA、oligo RNA、oligo DNA 以及多种核苷酸衍生物。该酶以独立于模板的方式催化 5'-磷酸与 3'-羟基之间形成磷酸二酯键。

规格:10U/μL

活性单位定义:一个单位定义为:在 20μL 反应体系中,37°C 孵育 30 分钟,将 0.4μg 等摩尔比的两条 23-mer 单链 RNA 寡核苷酸(其中一条是 5'-磷酸化的)进行连接,连接 50% 所用的酶量。

酶存储缓冲液:10mM Tris-HCl,0.1mM EDTA,50mM KCl,1mM DTT,50%(v/v)glycerol(pH7.5@25°C)。

T4 RNA ligase 1,T4 RNA ligase 2,RNaseR 在环状 RNA 酶法合成上的应用:

IVT 反应得到线性 RNA:值得注意的是,此步 IVT 反应,需要掺入一定比例的 GMP,获得含 GMP 的线性 RNA;

RNA 环化:通过 T4 RNA 连接酶 1(T4 Rnl 1)或 T4 RNA 连接酶 2(T4 Rnl 2)催化 RNA 末端 5'-磷酸和 3'-羟基的连接,将 RNA 分子内两端连接产生环状 RNA;

去除线性 RNA:RNaseR 能够去除反应液中的所有线性 RNA 分子,从而得到无线性 RNA 的环状 RNA。

注意:T4 RNA ligase 1 的反应体系中需要加入 ATP,可使用 ATP, 100mM Solution(Cat#R1331)。

储存条件:-20±5℃
不能储存在无霜冰箱中。
尽量避免反复冻融,避免放在温度经常变化的地方。这些温度波动会大大的降低产品的稳定性。

质控检测
1. Contaminant Assay: Free of Endonuclease, Exonuclease and RNase activities.
2. Endotoxin Assay: Pass.
3. Physical Purity: >90%.