enzymes_img1.svg

T4 RNA Ligase 2

T4 RNA 连接酶 2
目录号
ON-544-C010
纯度
10U/μL
储存条件
-20℃

产品描述:T4 RNA Ligase 2,也称为 T4 Rnl 2,具有分子间和分子内 RNA 连接活性。T4 RNA Ligase 2 连接双链 RNA 缺口的活性比连接单链 RNA 缺口的活性更高。该酶可连接相邻的 5'-磷酸和 3'-羟基。在双链结构中,该酶还可以连接 RNA 的 3'-羟基和 DNA 的 5'–磷酸。

规格:10U/μL

活性单位定义:一个单位定义为:在 20μL 反应体系中,37°C 孵育 30 分钟,将 0.8μg 等摩尔比的 28-mer 和 18-mer RNA 进行连接,连接 50% 所用的酶量。

酶存储缓冲液:10mM Tris-HCl,50mM KCl,35mM (NH4)2SO4,0.1mM DTT,0.1mM EDTA,50%(v/v) Glycerol(pH7.5@25℃)。

T4 RNA ligase 1,T4 RNA ligase 2,RNaseR 在环状 RNA 酶法合成上的应用:

IVT 反应得到线性 RNA:值得注意的是,此步 IVT 反应,需要掺入一定比例的 GMP,获得含 GMP 的线性 RNA;

RNA 环化:通过 T4 RNA 连接酶 1(T4 Rnl 1)或 T4 RNA 连接酶 2(T4 Rnl 2)催化 RNA 末端 5'-磷酸和 3'-羟基的连接,将 RNA 分子内两端连接产生环状 RNA;

去除线性 RNA:RNaseR 能够去除反应液中的所有线性 RNA 分子,从而得到无线性 RNA 的环状 RNA。

注意:T4 RNA ligase 2 的反应体系中需要加入 ATP,可使用 ATP, 100mM Solution(Cat#R1331)。

储藏条件:20±5℃
不能储存在无霜冰箱中。
尽量避免反复冻融,避免放在温度经常变化的地方。这些温度波动会大大的降低产品的稳定性。

质控检测
1. Contaminant Assay: Free of Endonuclease, Exonuclease and RNase activities.
2. Endotoxin Assay: Pass.
3. Physical Purity: >95% by SDS-PAGE with Coomassie® blue staining.